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进化吧聚合酶,我已经受够野生型的了

日期:2018-05-23 22:59:11 来源: 生物谷 点击:

DNA 聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的核心因素,在PCR中扮演中至关重要的作用,从某种意义来讲PCR技术就是耐热聚合酶的技术。生物医药领域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶,如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因为酶分子自身的结构和功能都有限制,随着研究人员实验要求的提升和生物样本复杂性的提高,野生型DNA聚合酶的局限性也逐渐凸显出来,如扩增效率低,特异性差,高AT 或GC 含量样本扩增结果差,样本中或PCR 系统中有些抑制剂对反应有干扰等等。

Roche旗下Kapa Biosystems开发出了“直接进化(directed evolution technology platform)”专利技术平台,运用遗传,基因工程,生物信息学等分子水平上技术,基因经过多轮的突变,筛选和扩增,获得高品质的生物酶,而且还可以为特殊需求量身定制生物酶。


图1:Kapa“直接进化“技术流程

KAPA 2G FAST DNA聚合酶,便是KAPA 通过“直接进化”技术生产的第二代工程酶之一,其兼具了扩增速度和灵敏度,以其为核心成分的KAPA2G Fast Multiplex Mix/KAPA SYBR/Probe FAST Universal mix,延伸时间缩短至1 sec/kb,实验时间缩短55%,且灵敏度更高,合成力更强,可兼容广泛的GC含量和产物长度。


图2 Kapa 2G Fast DNA Polymerase扩增速度1 Kb/sec,较野生型热启动酶扩增时间减少55%

图3 针对高/ 低GC 含量的模板,KAPA SYBR/probe FAST Universal master 相比竞争产品, 扩增效率更高, 线性更好

Kapa 2G Robust DNA聚合酶,更强的合成能力,用于解决广泛扩增子类型(富含GC或AT)的不一致扩增问题,并提高了对一般抑制剂的耐受性,适合于挑战性PCR应用和困难样本的扩增,显着降低使用多种酶和扩增方案的优化难度,灵敏度更高。



图4 对于富含GC 或AT 的靶标DNA,KAPA2G Robust DNA 聚合酶可以增加PCR 成功率

Kapa Long Range DNA聚合酶,结合了Taq DNA 聚合酶和古生菌(B-family) DNA聚

合酶的优势,通过定向改造,拥有高保真的特性,可以扩增长达15Kb的DNA片段,适用于超长序列的扩增,同时具有高灵敏度、高产量的优势。

Roche Kapa Biosystems通过“直接进化”技术,定向改造了种类十分丰富的适用于多种不同实验目的的生物酶,各有特点,可以满足不同的客户需求,且Kapa的系列产品可以适用于市场上现有的各类PCR/Real-time PCR仪器。

(责任编辑:sgx)

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