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你了解吗?一套中性粒细胞碱性磷酸酶染色的详细流程

日期:2018-10-29 23:07:47 来源: 中洪博元医学实验帮 点击:

今天,我们继续接着讲化学染色方法之中性粒细胞碱性磷酸酶染色(偶氮偶联法),昨天的你学到了吗?(请耐心花2分钟阅读完本文,建议推荐给小伙伴一起学)

一、实验原理
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二、试剂

(1)固定剂:10%甲醛甲醇溶液

(2)Tris-Hcl缓冲液的配制:Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴,PH调至9.2,4℃保存!

(3)作用(基质液): 

磷酸萘酚钠      5mg

N-N二甲基酰胺    1ml

Tris-Hcl液       4ml

坚固蓝RR盐       5mg

(4)复染液:1%中性红

三、实验步骤

1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片(标本片及对照片)加固定剂作用30秒(染缸),水洗待干;

2、滴加作用液,室温染色15min,水洗待干;

3、1%中性红复染1min

四、注意事项

(1) 重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳;

(2) 坚固蓝RR盐应适量:过多易造成染色失败,过少使反应减弱;

(3) 每次都要做阳性对照;

(4) 作用液新鲜配制,配好后要立即使用

五、结果观察

(对照片成熟中性粒细胞中出现棕黑色颗粒为阳性细胞,说明染色成功) 

正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外,其它血细胞均为阴性。且正常阳性率<40%,积分值30~130分。

六、NAP阳性结果及积分判断标准

“-”  0分,胞浆中无阳性颗粒

“+”   1分,胞浆中含有少量颗粒

“2+”  2分,胞浆中含有中等量颗粒

“3+”  3分,胞浆中含有丰富的颗粒,但胞核清楚

“4+”  4分,胞浆中含有丰富粗大的颗粒,但胞核不清楚

七、临床意义

增高:细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病,恶性淋巴瘤。

降低:慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组

(责任编辑:zqg)

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