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漫谈乙肝的“老巢”

日期:2019-11-29 22:04:33 来源:中华检验医学网 作者:李玉玮 点击:


作者 | 李玉玮

单位 | 唐山南湖医院检验中心




随着丙肝直接抗病毒药物(DAA)的上市,丙肝成为了可以被治愈的病毒性肝炎,并设想完成WHO2030彻底消除丙肝的目标。但是想一想为什么乙肝就不能被治愈呢?


这还要从它的“老巢”和它的逆转录说起。


先来看看乙肝病毒进入肝细胞之后是怎样复制的[1],如图:




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首先,HBV可能通过包膜L蛋白的PreS1区与肝细胞表面的特异性受体(钠离子-牛磺胆酸共转运多肽NTCP)结合,吸附到肝细胞表面,然后进入肝细胞,在胞质中脱去衣壳。


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然后在胞质中经过第二次脱衣壳,病毒的DNA进入细胞核内,在HBV病毒编码的DNA聚合酶的催化下,以负链DNA为模板,延长修补正链DNA缺口,形成共价闭合环状DNA,即”cccDNA”。

cccDNA即为HBV的“老巢”。

利用不同的启动子,以DNA负链为模板,转录出3.5Kb、2.4Kb、2.1Kb、0.8Kb四种mRNA。

其中0.8Kb编码X蛋白,2.1Kb编码HBsAg大中蛋白(M蛋白),2.4Kb编码HBsAg主蛋白(L蛋白)。3.5KbRNA具有双重功能,既可作为病毒前基因组RNA(pgRNA)复制子代病毒RNA,又具有PreC/CmRNA的功能。编码DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg前体蛋白。


3

病毒前基因组RNA、DNA聚合酶和衣壳蛋白(HBcAg)在胞质中装配成核衣壳。


4

在核衣壳内,以前基因组RNA为模板,在具有逆转录酶活性的DNA聚合酶的催化下逆转录合成HBV全长负链DNA,同时前基因组RNA模板被RNaseH降解。

新合成的负链DNA作为模板合成子代正链DNA,通常不等正链合成完毕,基因组即完成环化,形成核衣壳,因此子代基因组常为不完整双链DNA(RcDNA)。我们平时所测的乙肝DNA即RcDNA。


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核衣壳进入内质网和高尔基体内进行蛋白质加工并获得包膜和包膜蛋白成为完整的病毒颗粒,最后借助细胞分泌通路释放到细胞外。此外,核衣壳也可以重新将病毒组释放到细胞核内进行复制。多余的HBsAg的蛋白则被排出肝细胞外。


根据乙肝复制的方式不难发现,一方面HBV存在于肝细胞核内的cccDNA结构相当稳定,很难被破坏,药物的作用很难到达肝细胞核内,目前的药物均不能根除cccDNA。只要有它的存在,肝炎病毒就有可能在不断地复制。

另一方面,前基因组(pgRNA)编码合成的DNA聚合酶,不仅具有DNA聚合酶的活性,而且具有逆转录酶的活性。

我们都知道HIV是逆转录病毒,在整合酶的作用下,dsDNA能整合到宿主细胞染色体中。同样乙肝病毒亦具有逆转录的过程,也可能将HBVDNA整合到宿主细胞染色体中。

还有,HBV逆转录过程很不稳定,在逆转录过程中很容易发生病毒的变异,这样同样给治疗增加了难度。对于单独HBcAb阳性或是乙肝2、5阳性的一类人群也不能大意,只要HBcAb不转阴,存在于肝细胞核内的“老巢”就有可能在应用免疫抑制剂,进行移植,血液病,肿瘤存在免疫力低下的情况,重新再激活。

HBV的“老巢”如此厉害,该如何检测它的存在呢?

肝细胞穿刺检测,肝细胞活检,来诊断肝纤维化和肝脏炎症,但是创伤太大,很难在临床应用。

目前有专家发现新的HBV检测项目,能很好地反应cccDNA的水平。一个是HBV RNA。有研究发现HBV感染体体内不仅存在Dane颗粒,还存在HBV RNA病毒样颗粒。如图[2]



HBV RNA病毒样颗粒中含有前基因组(pgRNA),而pgRNA来源于cccDNA,我们都知道,由于HBV能整合到宿主体内的原因,体内低值的HBsAg也不能完全反应是否还有cccDNA老巢的存在。

因为应用抗病毒药物作用的靶点是逆转录酶,pgRNA不能逆转录成负链DNA,所以DNA检测阴性。

另一个检测指标是HBcrAg,包括HBcAg、HBeAg、前核心蛋白p22cr,同样都是来自前基因组RNA。所以这两项指标的存在就直接反映着cccDNA的存在。


对于应用抗病毒药物治疗或是低值阳性HBsAg的一些患者,使用超灵敏的HBV DNA检测阴性,可以加测HBV RNA和HBcrAg,更能反映“老巢”的存在。


虽然现在HBV还不能完全治愈,随着乙肝疫苗的普遍接种,乙肝感染率也是在逐年下降,慢性HBV感染约9300万,但是真正发生慢性乙肝肝炎的只有2000万。很多人与乙肝病毒都是和平共存的状态,只要保持良好的生活习惯,提高免疫力,坚持定期体检复查,不存在肝硬化或是肝癌家族史,有些人到老也不会发病的。




参考文献

[1]李凡,徐志凯等. 医学微生物学,第9版 [M].北京:人民卫生出版社,2018,7:258-259.

[2]Wang J,Shen T,Huang X,et al. Serum hepatitis B virus RNA is encapsidated pregenome  RNA that  may beassociatad with persistence of viral infectiom  and rebound.  J Hepatol,2016,65:700-710.


End




(责任编辑:xsq)

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